Ili kuweza kutoa rangi kwenye kloroplasti huahirishwa katika bafa ya kutengwa. Ili kuweza kutoa rangi kutoka kwa kloroplast, lazima tuondoe bafa kwanza. Ni ipi njia bora ya kutenganisha kloroplast kutoka kwa bafa? tumia centrifuge kutenganisha
Je, unatengaje kloroplast?
Katika mbinu ya kutenganisha kloroplast, ukuta wa seli huvunjwa kimitambo kwa kutumia kichanganyaji au homogenizer. Kisha tishu za jani zisizovunjika na uchafu wa seli huondolewa kwa kuchujwa. Kloroplasti hukusanywa kwa kupenyeza katikati kwa kutumia mteremko wa percoll.
Je, unatengeneza vipi bafa ya kutenganisha kloroplast?
Andaa kiasi kinachohitajika cha bafa ya 1X ya Chloroplast ya Kutenganisha kwa kupunguza akiba ya 2X 1:1 na dH2O maji Ongeza 10 µL ya 10% ya suluhu ya BSA kwa mililita ya 1X Chloroplast Bafa ya Kutengwa. Kabla tu ya kutumia, ongeza 1 µL ya DTT kwa kila mL 1 ya Bafa ya Kutenga ya Chloroplast. Weka bafa hii lebo kama 'Bafa Kamili'.
Ni nini kwenye bafa ya kutengwa kwa kloroplast?
Bafa ya kutenganisha DNA ilijumuisha 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA, na 1 mM DTT Lise ya kloroplast ilipatikana kwa kuamilishia pellet ya kloroplast yenye 8 ml ya bafa ya kutengwa ya DNA, 1.5 ml 20% SDS, 20 µl 2-Mercaptoethanol na 30 µl Proteinase K (10 mg/ml) kwenye bomba la centrifuge la 55°C kwa saa 4.
Ni pH gani ya bafa inayotumika kutengeneza homogenize jani la mchicha katika itifaki ya kutengwa kwa kloroplast?
Mchicha umepakiwa na kloroplast nzuri na hujitenga kwa urahisi. Utalazimika kuweka majani kwenye kichanganya baridi chenye 0.1 M phosphate buffer, pH 7.5 na 0.5 M sucrose ili kuzuia yasipasuke.
